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【转载】血塞通注射液药效物质基础研究概要  

2016-12-16 18:01:58|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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血塞通注射液药效物质基础研究概要

1. 前言

        血塞通注射液,是利用从五加科植物三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]根中提取的有效部位-三七总皂苷Panax Notoginseng Saponins,PNS)精制而成的灭菌水溶液。是目前中药注射剂中年销售额最大的品种之一,具有活血化瘀,通脉活络之功效,临床用于中风偏瘫、动脉粥状硬化性血栓性脑梗塞、脑血栓、脑血管出血后遗症及视网膜中央静脉阻塞等症的治疗。

        研究中药注射液的药效物质基础,对注射液的质量控制及提高,保证用药安全以及基于药效物质基础研究的中药注射剂的二次开发均具有重要意义。本研究旨在对血塞通注射液中的皂苷类化学成分及其含量进行系统研究,并在此基础上,通过单体皂苷及皂苷混合物的抗血小板聚集活性研究,探讨皂苷类成分与血塞通注射液的功能主治的相关性。

血塞通注射液的皂苷类药效物质基础研究概要 - 草木山川 - 药学文献与研究

 

2.  研究方法与结果

2.1  血塞通注射液中三七总皂苷成分的分离与鉴定

        本研究首先按照血塞通注射液的制备工艺,制备了三七总皂苷,并对其化学成分进行了分离与鉴定。

结果从中分离并鉴定了20种人参皂苷类成分,包括10种常见人参皂苷和10种稀有人参皂苷。其中常见人参皂苷有:人参皂苷F1、Rg1、Rf、Rg2ReRdRb1Rb2Rb3三七皂苷R1;稀有人参皂苷有:人参皂苷Rk3、Rg6、F4、Rk1、Rg5、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3和三七皂苷R2。

血塞通注射液的皂苷类药效物质基础研究概要 - 草木山川 - 药学文献与研究

2.2  血塞通注射液中三七总皂苷成分的含量测定

2.2.1 稀有人参皂苷的含量检测

        采用离子液体双水相萃取-高效液相色谱法,对血塞通注射液中的稀有人参皂苷类成分进行分析,测定了其中7种稀有人参皂苷(人参皂苷Rg6、F4、Rk3、Rk1、Rg5、20(S)-Rg3和20(R)-Rg3)的含量。

        通过实验条件优化,最终建立了注射液用量为3.0 m L、超声萃取时间为5 min、体系p H为9.3,萃取体系为1.00 mL[Bmim]Br离子液体和3.50 g K2HPO4的样品前处理方法。本方法7种稀有人参皂苷的检出限在0.170.48μg m L-1范围内,加标回收率在89.05%-111.29%(n=6)范围内,其RSD值范围为0.47-2.47%(n=6),说明此方法准确,灵敏度高,重现性好,适用于测定血塞通注射液中微量稀有人参皂苷的含量。

        实验结果表明:同一厂家不同批次的产品中,7种稀有人参皂苷成分的含量无明显差异;不同厂家相同规格(50 mg/m L)的注射液中,7种稀有人参皂苷单体在血塞通注射液(50 mg/m L)中的含量具有一定的差别,分别在86.01-95.10(Rg6)、48.30-60.81(F4)、132.89-156.76(Rk3)、199.90-223.83(20(S)-Rg3)、84.39-105.25(20(R)-Rg3)、52.64-60.22(Rk1)、51.60-70.12(Rg5)μg/m L范围内但7种稀有人参皂苷成分的含量之和无明显差异,分别为714.08、713.06μg/mL。

2.2.2  常见人参皂苷的含量检测

        利用高效液相色谱法,对血塞通注射液中7种常见人参皂苷(人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd、Rb2、F1和三七皂苷R1)进行含量测定。

        结果表明:血塞通注射液中常见人参皂苷的含量比稀有人参皂苷高很多,它们在血塞通注射液(50 mg/m L)中的含量分别在4.44-5.09(R1)、12.59-13.84(Rg1)、1.81-1.91(Re)、13.37-14.35(Rb1)、0.74-0.96(Rb2)、0.085-0.132(F1)、3.46-3.90(Rd)mg/m L范围内

血塞通注射液的皂苷类药效物质基础研究概要 - 草木山川 - 药学文献与研究

 

2.3 三七药材中稀有人参皂苷含量的检测

        为明确血塞通注射液中稀有人参皂苷类成分,是来自于三七,还是来自于注射液制备过程中的其他环节,本研究对三七中的稀有人参皂苷进行了含量测定。

        为了防止三七中的常见人参皂苷高温下发生水解,产生原本不存在的稀有人参皂苷,影响测定结果的准确性,本研究建立了超声辅助离子液体双水相提取法,在常温下对三七中的稀有人参皂苷进行了提取,并利用高效液相色谱法进行含量测定。

        通过优化实验条件,建立了利用5.0 m L水、1.00 m L[Bmim]Br离子液体、7.0 g K2HPO4的提取体系,室温超声提取20 min的样品前处理方法。

        实验结果,从三七中共检出3种稀有人参皂苷,它们分别是Rk3、20(S)-Rg3和Rk1。本测定方法的检出限在0.18-0.48μg m L-1范围内,加标回收率在92.07%-110.55%(n=6)范围内,其RSD值范围为2.38-5.43%(n=6)。

        对三批三七药材的测定结果表明,上述3种稀有人参皂苷在三七中的含量分别在0.001271-0.001406%(Rk3)、0.02238-0.02292%(20(S)-Rg3)、0.002485-0.002730%(Rk1)范围内。

        与三七药材相比,血塞通注射液中出现了4种药材中并不存在的稀有人参皂苷20(R)-Rg3、Rg6、F4、Rg5。这可能与三七总皂苷制备、注射液配制、灭菌等过程有关,在上述过程中常见人参皂苷在较高温度下发生了脱糖、脱水等反应。

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2.4  血塞通注射液中各皂苷成分对血小板聚集的抑制作用研究

2.4.1 皂苷混合物对血小板聚集的抑制作用

        大量的临床应用证明,血塞通注射液对脑梗塞、脑血栓及视网膜中央静脉阻塞等症具有确切的疗效,而血小板聚集是引起此类血栓性疾病的最关键的因素之一。为探明血塞通注射液中,皂苷类成分与抗血栓药效作用之间的关联性,本研究利用抗二磷酸腺苷(ADP)引发的血小板聚集药物筛选模型,研究了血塞通注射液、按照测得的市售血塞通注射液中各人参皂苷实际含量配制的常见人参皂苷混合物、稀有人参皂苷混合物、常见人参皂苷+稀有人参皂苷混合物(总皂苷混合物)对ADP引发的血小板聚集的抑制作用。

        结果显示:血塞通注射液、常见人参皂苷混合物、稀有人参皂苷混合物以及总皂苷混合物均表现出较好的抑制活性。常见人参皂苷混合物、稀有人参皂苷混合物以及总皂苷混合物抗ADP引发的血小板聚集活性大小顺序为:总皂苷混合物>常见人参皂苷混合物>稀有人参皂苷混合物。

2.4.2 皂苷单体对血小板聚集的抑制作用

        研究了血塞通注射液中含有的常见人参皂苷和稀有人参皂苷单体对ADP引发的血小板聚集的抑制作用。

        结果显示:血塞通注射液中的15种人参皂苷单体中除人参皂苷F1外,其余14种皂苷单体均表现出较好的抑制活性,且具有浓度依赖性。在同一浓度下,除人参皂苷Rk3、Rh1外,稀有人参皂苷单体比常见人参皂苷单体均表现出了更高的抑制活性,14种皂苷单体抗ADP引发的血小板聚集活性大小顺序为Rg5> Rk1、Rg6> F4> Rg3> Rd、Re、Rb3、Rb2> Rk3> Rh1> Rb1> R1> Rg1。

        上述研究结果表明,血塞通注射液中的皂苷类成分是其抗血栓作用的药效物质基础,其对脑梗塞、脑血栓及视网膜中央静脉阻塞等疾病的治疗作用,可能主要来源于其中的人参皂苷类成分。在同一浓度下,稀有人参皂苷单体的抗血小板聚集活性比常见人参皂苷单体强,但是按照注射液浓度配比,稀有人参皂苷混合物的活性没有常见人参皂苷混合物强,这可能与其在注射液中的浓度明显低于常见人参皂苷有关。由此可以预期,通过提高注射液中稀有人参皂苷含量,可以进一步增强其抗血栓药效作用。

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结语

        总之,本研究通过对血塞通注射液中人参皂苷类化学成分的分离、鉴定及含量测定,探明了血塞通注射液中的人参皂苷类成分的种类及含量,并通过抗ADP引发的血小板聚集活性研究,初步证明了其中的人参皂苷类成分是其主要药效物质之一。

        本研究结果不仅对血塞通注射液的药效物质基础研究提供了参考,同时对血塞通注射液质量标准的提高、用药安全以及二次开发提供了新的科学依据。


实验研究: 李兰杰     整理编辑田农

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